恺佧mRNA疫苗GMP原料酶及质谱检测加帽率服务

 

世界各地的疫情仍在反复,新冠病毒变异毒株不断蔓延,全球对疫苗的迫切需求仍在持续。疫苗种类有传统灭活疫苗、减毒疫苗、重组腺病毒疫苗、DNA疫苗、mRNA疫苗等。其中,mRNA疫苗高达95%的保护率使其成为疫苗中的后起之秀,随着辉瑞/BioNtech、Moderna公司BNT162b2和mRNA-1273疫苗的上市,极大推动了mRNA疫苗的发展进程。mRNA疫苗正开启了一个新的百亿赛道,国内各大药企争相涌入mRNA技术赛道。

新冠mRNA疫苗的工作原理是将病毒的部分mRNA片段(S蛋白序列或S蛋白上受体结合区RBD序列)以特殊的脂质膜包裹,注入人体细胞内产生抗原,再由此激发特异性免疫反应,达到形成免疫记忆的效果。相较于其他疫苗,其优势主要体现在:

  • mRNA不进入细胞核,不会整合到人体基因组,消除了插入突变,极大程度上避免了引发患肿瘤癌症等疾病的风险;
  • 可激活体液免疫及T细胞免疫双重机制;
  • 研发周期短,尤其是在应对病毒变异时,只需对S蛋白序列的碱基进行突变,就能快速开发新型候选苗;
  • 不带有病毒成分,没有感染风险。

mRNA疫苗属于第三代疫苗,它的应用场景非常广阔,除了能够用于预防传染性疾病外,也为肿瘤、免疫疾病、基因相关疾病的治疗带来希望。mRNA疫苗的开发包括线性质粒制备、mRNA体外合成和修饰、纯化、载体递送等流程。每一步流程都有严格的质量控制。

有效的mRNA疫苗需要保证稳定性,在mRNA 5'端加甲基化的鸟苷酸帽子结构(m7GPPPN)(fig.1),可有效避免 5’→3’核酸外切酶的攻击,从而提高mRNA的稳定性。此外,帽子结构是mRNA翻译起始的必要结构,协助核糖体与mRNA结合,使翻译正常进行。 

fig.1 酶法加帽。本图引自Fabian M ,  Nils M ,  Andrea R . Synthetic mRNA capping[J]. Beilstein Journal of Organic Chemistry, 2017, 13:2819-2832.

 

恺佧生物专注于mRNA治疗市场,提供全系列(GMP&非GMP)mRNA体外合成所需的的优质酶原料。其中,恺佧生物匠心自主研发的高效率加帽的Vaccinia Capping Enzyme,其加帽效率远优于Supplier N。

 恺佧Vaccinia Capping Enzyme加帽效率远优于Supplier N

值得一提的是,国家药监局药审中心发布的《预防用新型冠状病毒mRNA疫苗药学研究技术指导原则》,提到对于mRNA体外合成需要进行过程和产物的控制检测,其中,加帽率作为mRNA原液质控的重要标准,需进行准确且定量的检测方法。因此,恺佧生物精心搭建了LC-MS平台且开发出了成熟的质谱检测方法,使得加帽率检测更趋真实、可靠。目前,恺佧生物可根据客户需求提供加帽率测定定制服务。

恺佧LC-MS平台检测cap1加帽率

使用恺佧牛痘病毒加帽酶和2-O’-甲基转移酶对mRNA加Cap1帽结构,经LC-MS平台检测加帽率为95.16%。
注:加帽率与牛痘病毒加帽酶、2-O’-甲基转移酶的性能以及mRNA二级结构等因素有关。

恺佧生物根据客户需求提供加帽率测定定制服务

恺佧GMP级别产品质量管理体系
      ♦  GMP质量管理体系经ISO 13485:2016认证
                                 ♦ MES数字化生产管理体系
      ♦  高于进口GMP产品标准的无菌检测                                   ♦ 健全的人员培训体系
      ♦  质量管理体系文件标准化                                    ♦ 完整的批生产和QC记录
      ♦  符合申报要求,可提供申报用文件                                  ♦ 稳定性验证严格参考法规要求
      ♦  工艺验证严格参照法规要求                                  ♦ 药典标准放行检测
完整的QC放行检测(以T7 RNA Polymerase为例)
      ♦  活性不低于50kU/ml                                       ♦ 蛋白纯度不低于95%
      ♦ 非特异性核酸酶残留为阴性                                       ♦ 核酸内切酶残留为阴性
      ♦ 核酸外切酶残留为阴性
                                      ♦ RNA酶残留为阴性
      ♦ 蛋白酶残留为阴性
                                      ♦ 重金属残留不高于10ppm
      ♦ 细菌内毒素不高于10EU/ml
                                      ♦ 宿主DNA残留不高于100pg/mg
      ♦ 宿主蛋白残留不高于50ng/mg
                                      ♦ 镍盐残留不高于10ppm
      ♦ 微生物限度不高于1CFU/10ml
                                      ♦ pH 7.9±0.5

 

产品列表

货号 名称 规格  
T7P-EE101 T7 RNA Polymerase 5000U/25kU 立即询价
GMP-T7P-EE101 T7 RNA Polymerase(GMP grade) 50kU/1MU 立即询价
T7P-EE102 T7 RNA Polymerase Kit 5000U/25kU 立即询价
PYR-EE201 Pyrophosphatase, Inorganic 10U/50U 立即询价
GMP-PYR-YE101 Pyrophosphatase, Inorganic(GMP grade) 100U/800U 立即询价
RNI-ME001 Murine RNase Inhibitor 2000U/10kU 立即询价
GMP-RNI-ME101 Murine RNase Inhibitor(GMP grade) 40kU/2.2MU 立即询价
DNI-EE001 DNase I 1000U/5000U 立即询价
GMP-DNI-EE001 DNaseI(GMP grade) 4kU/40kU 立即询价
BSA-EE101 限制性内切酶 Bsa I 1000U/5000U 立即询价
GMP-BSA-EE101
限制性内切酶 Bsa I(GMP grade)
20kU/400kU
立即询价
VCS-VE101 Vaccinia Capping Enzyme 500U/5000U 立即询价
GMP-VCS-VE101 Vaccinia Capping Enzyme(GMP grade) 10kU/1MU 立即询价
MEH-VE101
mRNA Cap 2´-O-Methyltransferase
2500U/25kU
立即询价
GMP-MEH-VE101 mRNA Cap 2´-O-Methyltransferase(GMP grade) 50kU/5MU 立即询价
PLA-EE101 E. coli Poly(A) Polymerase 100U/500U 立即询价
GMP-PLA-EE101 E. coli Poly(A) Polymerase(GMP grade) 5kU/100kU 立即询价

 

 

 

 

 

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