恺佧mRNA疫苗GMP原料酶及质谱检测加帽率服务

世界各地的疫情仍在反复，新冠病毒变异毒株不断蔓延，全球对疫苗的迫切需求仍在持续。疫苗种类有传统灭活疫苗、减毒疫苗、重组腺病毒疫苗、DNA疫苗、mRNA疫苗等。其中，mRNA疫苗高达95%的保护率使其成为疫苗中的后起之秀，随着辉瑞/BioNtech、Moderna公司BNT162b2和mRNA-1273疫苗的上市，极大推动了mRNA疫苗的发展进程。mRNA疫苗正开启了一个新的百亿赛道，国内各大药企争相涌入mRNA技术赛道。

新冠mRNA疫苗的工作原理是将病毒的部分mRNA片段（S蛋白序列或S蛋白上受体结合区RBD序列）以特殊的脂质膜包裹，注入人体细胞内产生抗原，再由此激发特异性免疫反应，达到形成免疫记忆的效果。相较于其他疫苗，其优势主要体现在：

• mRNA不进入细胞核，不会整合到人体基因组，消除了插入突变，极大程度上避免了引发患肿瘤癌症等疾病的风险；
• 可激活体液免疫及T细胞免疫双重机制；
• 研发周期短，尤其是在应对病毒变异时，只需对S蛋白序列的碱基进行突变，就能快速开发新型候选苗；
• 不带有病毒成分，没有感染风险。

mRNA疫苗属于第三代疫苗，它的应用场景非常广阔，除了能够用于预防传染性疾病外，也为肿瘤、免疫疾病、基因相关疾病的治疗带来希望。mRNA疫苗的开发包括线性质粒制备、mRNA体外合成和修饰、纯化、载体递送等流程。每一步流程都有严格的质量控制。

有效的mRNA疫苗需要保证稳定性，在mRNA 5'端加甲基化的鸟苷酸帽子结构（m7GPPPN）(fig.1)，可有效避免 5’→3’核酸外切酶的攻击，从而提高mRNA的稳定性。此外，帽子结构是mRNA翻译起始的必要结构，协助核糖体与mRNA结合，使翻译正常进行。 

fig.1 酶法加帽。本图引自Fabian M ,  Nils M ,  Andrea R . Synthetic mRNA capping[J]. Beilstein Journal of Organic Chemistry, 2017, 13:2819-2832.

恺佧生物专注于mRNA治疗市场，提供全系列（GMP&非GMP）mRNA体外合成所需的的优质酶原料。其中，恺佧生物匠心自主研发的高效率加帽的Vaccinia Capping Enzyme，其加帽效率远优于Supplier N。

 恺佧Vaccinia Capping Enzyme加帽效率远优于Supplier N

值得一提的是，国家药监局药审中心发布的《预防用新型冠状病毒mRNA疫苗药学研究技术指导原则》，提到对于mRNA体外合成需要进行过程和产物的控制检测，其中，加帽率作为mRNA原液质控的重要标准，需进行准确且定量的检测方法。因此，恺佧生物精心搭建了LC-MS平台且开发出了成熟的质谱检测方法，使得加帽率检测更趋真实、可靠。目前，恺佧生物可根据客户需求提供加帽率测定定制服务。

恺佧LC-MS平台检测cap1加帽率

使用恺佧牛痘病毒加帽酶和2-O’-甲基转移酶对mRNA加Cap1帽结构，经LC-MS平台检测加帽率为95.16%。
注：加帽率与牛痘病毒加帽酶、2-O’-甲基转移酶的性能以及mRNA二级结构等因素有关。

恺佧生物根据客户需求提供加帽率测定定制服务

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